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【柏恒科技小課堂】qPCR反應(yīng)漫談（續(xù)）發(fā)布時(shí)間：2026-01-04

在上一期的qPCR反應(yīng)漫談中，從一開(kāi)始沃森和克里克兩位基因?qū)W奠基人的兩個(gè)論點(diǎn)簡(jiǎn)單延伸至染料法和探針?lè)▋深?lèi)常見(jiàn)的qPCR反應(yīng)。這一期做一個(gè)從PCR反應(yīng)過(guò)程出發(fā)到一些實(shí)驗(yàn)問(wèn)題優(yōu)化的分享。01(先拋磚）PCR反應(yīng)原理：PCR通過(guò)變性、退火和延伸三個(gè)步驟的循環(huán)往復(fù)，模擬DNA在體外擴(kuò)增的...

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2022
4-19

核酸提取儀使用注意事項(xiàng)
核酸提取儀主要由磁套、磁棒、進(jìn)給板和步進(jìn)電機(jī)四個(gè)部分組成；磁套位于磁棒的下方且對(duì)齊形成一對(duì)互相配合使用，進(jìn)給板位于磁套的下方；磁套、磁棒和進(jìn)給板分別連接一個(gè)步進(jìn)電機(jī)；磁套和磁棒的步進(jìn)電機(jī)控制磁套和磁棒的上下相對(duì)運(yùn)動(dòng)，與進(jìn)給板相接的步進(jìn)電機(jī)控...
2022
4-12

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使用的基本步驟
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀技術(shù)的原理：體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs（脫氧核糖核苷三磷酸），Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù)“變性→退火一引物延伸”過(guò)...
2022
4-6

程序降溫盒使用經(jīng)驗(yàn)分析
程序降溫盒的使用方法直都搞不明白，覺(jué)得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時(shí)間(細(xì)胞剛開(kāi)始還沒(méi)凍的時(shí)候就是室溫)，然后把細(xì)胞放進(jìn)去，再一起移到-80度，這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢?時(shí)間使用長(zhǎng)了，感覺(jué)里面的液體是不是異丙醇啊，使用...
2022
3-23

三槽梯度PCR儀你真的了解嗎?
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這...
2022
3-16

程序降溫盒使用小技巧
程序降溫盒在沒(méi)有酒精或任何液體的情況下,能確保在低溫冰箱中樣品的降溫速率為-1℃/分鐘。它們可以運(yùn)用于各種細(xì)胞類(lèi)型，包括干細(xì)胞，原代細(xì)胞和細(xì)胞系。這對(duì)于大多數(shù)需要培養(yǎng)的細(xì)胞系來(lái)說(shuō)是非常理想的。已經(jīng)通過(guò)干細(xì)胞，原代細(xì)胞和細(xì)胞系的使用，證明了提...
2022
3-10

迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法
迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項(xiàng)可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度，通過(guò)每列之間≥2°C的間隔溫度升降，使得可同時(shí)對(duì)于一系列的溫度進(jìn)行測(cè)試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個(gè)或更...

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